Qual è la funzione di tracciamento del colorante nell'elettroforesi su gel?

L'elettroforesi su gel separa i frammenti di DNA in base alle dimensioni.

L'elettroforesi su gel è un modo per separare i frammenti di DNA in base alle loro dimensioni. Aggiungi il colorante di tracciamento a ciascun campione di DNA per aiutarti a vedere il campione e tracciare il progresso dei frammenti di DNA attraverso il gel.

Significato

Per separare frammenti di DNA, allo scopo di misurare le loro dimensioni o isolare un particolare frammento, gli scienziati mettono il DNA in un gel di agarosio immerso in una soluzione che viene caricata con una corrente elettrica. La corrente spinge i frammenti di DNA attraverso il gel, e poiché il gel è poroso, frammenti di DNA più piccoli si muovono più rapidamente. Viaggiano più lontano dei frammenti più grandi nella stessa quantità di tempo.

Scopo

Il DNA è incolore quando è in soluzione in una provetta. Per rendere il campione più facile da vedere, sia nella provetta che nel gel, si aggiunge un colorante di tracciamento colorato al campione. La tintura non influisce affatto sul DNA.

puntamento

La solita colorazione di tracciamento è blu di bromofenolo in una soluzione di glicerolo al 50%. Il blu di bromofenolo colora il campione blu brillante in modo che sia facile tracciare il suo avanzamento attraverso il gel. Quando il colorante di tracciamento ha percorso circa 3/4 della lunghezza del gel, è il momento di spegnere la corrente elettrica.

Densità

La colorazione di tracciamento è densa a causa della sua alta concentrazione di glicerolo. Ciò fa affondare i campioni di DNA nelle fessure di caricamento del gel, piuttosto che fluttuare nella soluzione sopra il gel che trasporta la corrente elettrica.

Dye Migration

Il blu di bromofenolo migra attraverso una soluzione di agarosio all'incirca alla stessa velocità di un filamento di DNA contenente 300 coppie di basi. Se si desidera monitorare il progresso di filamenti di DNA più grandi, è possibile utilizzare un colorante di tracciamento con xilocianolo, che migra alla stessa velocità di un filamento di DNA con 4.000 coppie di basi.

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